上海晶抗生物牛白介素12B(IL12B)ELISA試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(Sandwich ELISA),用于定量檢測(cè)牛血清、血漿等生物樣本中的IL12B(又稱 IL-12 p40 亞基)含量。

一、核心原理
利用抗原 - 抗體特異性結(jié)合與酶促顯色反應(yīng),通過(guò)“夾心"結(jié)構(gòu)捕獲目標(biāo)物,并將其濃度轉(zhuǎn)化為可測(cè)量的光信號(hào)。
固相捕獲:酶標(biāo)板微孔內(nèi)預(yù)包被高特異性的抗牛 IL12B 捕獲抗體。
樣本結(jié)合:加入待測(cè)樣本(或標(biāo)準(zhǔn)品),其中的牛IL12B抗原與捕獲抗體特異性結(jié)合。
檢測(cè)抗體結(jié)合:加入標(biāo)記的檢測(cè)抗體,識(shí)別并結(jié)合已捕獲的IL12B抗原,形成“捕獲抗體-IL12B-檢測(cè)抗體"的夾心復(fù)合物。
酶聯(lián)放大:加入辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的親和素,親和素與高親和力結(jié)合,將酶連接到復(fù)合物上。
顯色定量:加入TMB 底物,HRP 催化底物顯藍(lán)色;加終止液(硫酸)后變黃。
信號(hào)讀?。好笜?biāo)儀測(cè)450nm吸光度(OD 值),OD值與IL12B濃度正相關(guān)。
二、完整實(shí)驗(yàn)流程
加樣:加入標(biāo)準(zhǔn)品/樣本→溫育(抗原-捕獲抗體結(jié)合)→ 洗滌去未結(jié)合物。
加檢測(cè)抗體:加入標(biāo)記檢測(cè)抗體→溫育(形成夾心)→ 洗滌。
加酶結(jié)合物:加入HRP-親和素→溫育→洗滌。
顯色:加TMB底物→避光溫育顯色。
終止與讀數(shù):加終止液→測(cè)OD450值。
計(jì)算:標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合→計(jì)算樣本IL12B濃度。
三、關(guān)鍵特點(diǎn)
特異性:雙抗體精準(zhǔn)識(shí)別牛IL12B,交叉反應(yīng)低。
靈敏度:檢測(cè)限通常 <10pg/mL。
定量:OD值與濃度線性相關(guān),結(jié)果精準(zhǔn)。
通用:適用于血清、血漿、細(xì)胞上清等。
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